1、相差物鏡的調(diào)換安裝
從物鏡轉(zhuǎn)換器上拆下普通物鏡，旋入相差物鏡，與普通目鏡配套使用。
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2、轉(zhuǎn)盤聚光器的調(diào)換安裝
旋轉(zhuǎn)聚光器升降螺旋，把普通明視場聚光器至最低位，旋松固緊螺絲，卸下聚光器。把轉(zhuǎn)盤聚光器安放到相應(yīng)位置上，旋緊固緊螺絲，轉(zhuǎn)動聚光器升降螺旋，使聚光器升至最高位置。轉(zhuǎn)盤聚光器的標(biāo)示孔，朝向操作者。此時，轉(zhuǎn)盤聚光器上面的聚光鏡部分，進(jìn)入光路；下面的環(huán)狀光闌轉(zhuǎn)盤，可視需要轉(zhuǎn)動使用，把與物鏡匹配的環(huán)孔旋入光路，使之處于轉(zhuǎn)盤聚光鏡下。
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3、把綠色濾色鏡放入鏡座的濾色鏡架上
轉(zhuǎn)盤聚光器調(diào)換安裝后，要進(jìn)行合軸調(diào)中，使聚光器的光軸與顯微鏡的主光軸合一。其步聚如下：
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（1）把轉(zhuǎn)盤聚光器的環(huán)狀光闌調(diào)至“0”位，明視場照明的普通可變光闌進(jìn)入光路。
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（2）旋轉(zhuǎn)聚光器升降螺旋，聚光器升至最高位。
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（3）接通照明光源，使視場明亮。
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（4）把被檢樣品放到載物臺上，用低倍（4×）物鏡聚焦。
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（5）縮小鏡座上的視場光闌開孔，至最小。
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（6）從目鏡觀察，在暗視場中可見一縮小的、明亮的、多角形的視場光闌圖像。
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（7）轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)盤聚光器的兩個調(diào)中桿，推動聚光器，把視場中的明亮的多角形的視場光闌圖像，調(diào)至視場中央。
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（8）開放視場光闌至視場同大，視兩者周邊是否完全重合；否則，復(fù)用調(diào)中螺桿，使聚光器精神調(diào)中。
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4、相板圓環(huán)與環(huán)狀光闌圓環(huán)的合軸調(diào)中
相差物鏡的后焦面裝有相板。按物鏡放大率與反差效果的不同，相板圓環(huán)（共軛面）的大小與結(jié)構(gòu)亦不同。轉(zhuǎn)盤聚光器的環(huán)狀光闌為一系列的透光的，不同大小的明亮環(huán)孔，與不同放大率的物鏡相應(yīng)。使用時嚴(yán)格匹配，當(dāng)物鏡更換時，環(huán)狀光闌亦作相應(yīng)的更換或調(diào)整。
在視場中觀察所見，環(huán)狀光闌為一明亮的圓環(huán)，而相板的圓環(huán)為一暗環(huán)。互相匹配的明環(huán)與暗環(huán)大小一致。在使用時兩者要合軸，互相重疊。兩環(huán)的重疊，須通過合軸調(diào)節(jié)方能取得。其方法如下：
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（1）相差物鏡與環(huán)狀光闌的匹配：正確地匹配取決于所用物鏡放大率。例如，當(dāng)使用40×相差物鏡時，環(huán)狀光闌轉(zhuǎn)向ph3或40位，使相應(yīng)地環(huán)狀光闌進(jìn)入光路。
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（2）把CT放入目鏡筒：從目鏡筒取出一個目鏡，換入調(diào)中合軸望遠(yuǎn)鏡（CT）。CT為一眼透鏡，也是可行升降調(diào)節(jié)的望遠(yuǎn)目鏡，專為觀察視場中明環(huán)與暗環(huán)圖像之用。因?yàn)橛靡话隳跨R看不見兩環(huán)的清晰圖像。CT在使用前眼透鏡應(yīng)處于最低位，即CT為最短小的狀態(tài)。
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（3）明環(huán)與暗環(huán)的聚焦：一手固定位于目鏡筒中的CT鏡筒，使其透鏡位置不能上移，另一手逆時針轉(zhuǎn)到CT上部可調(diào)的眼透鏡部分。轉(zhuǎn)動的同時，通過CT向現(xiàn)場中觀察，即國旋轉(zhuǎn)邊觀察初始，兩環(huán)可能為模糊的圖像，繼續(xù)轉(zhuǎn)動CT目鏡可調(diào)部分至清晰地窺見明環(huán)與暗環(huán)止。
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（4）明環(huán)與暗環(huán)的調(diào)中重疊：相板的暗環(huán)是固定不動的，處于光路之中，暗環(huán)的中心，即顯微鏡光軸的中心。環(huán)狀光闌的亮環(huán)可調(diào)節(jié)移動。轉(zhuǎn)盤聚光器環(huán)狀光闌的位置，因聚光器的可調(diào)其中心位置，往往偏離光軸軸心，需調(diào)整，使其歸中。環(huán)狀光闌的調(diào)中裝置或部件，因廠家或型號的不同而有別。如OLYMPUS?BH2-PC型相差顯微鏡，環(huán)狀光闌調(diào)中裝置為位于轉(zhuǎn)盤聚光器兩側(cè)的兩個伸絲自如的調(diào)中螺桿，用以操縱改換環(huán)狀光闌的方位，達(dá)到調(diào)中；而Nikon?FIVORPHOT型顯微鏡的相差裝置，其環(huán)狀光闌的調(diào)中部件為位于轉(zhuǎn)盤聚光器表面，可向任一方向滑動的環(huán)狀鈕。調(diào)中時，手指調(diào)中裝置，移動明環(huán)，使之與暗環(huán)合一。在兩環(huán)調(diào)中過程，始終在通過CT的觀察下進(jìn)行。
在調(diào)節(jié)過程中，如亮環(huán)比暗環(huán)小，并位于暗環(huán)內(nèi)側(cè)時，應(yīng)降低聚光器位置，使亮環(huán)放大。若亮環(huán)大于暗環(huán)時，應(yīng)提升聚光器，使亮環(huán)縮小。如聚光器已升至最頂點(diǎn)還不能完全重合，可能是載玻片過厚之故。
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（5）回裝觀察目鏡：待相差物鏡的暗環(huán)與環(huán)狀光闌的亮環(huán)調(diào)中、重疊后，從目鏡筒中取出CT，放回觀察用的接目鏡，以便鏡檢觀察。
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5、相差物鏡的選擇
相差物鏡有不同倍率、不同反差類別和反差程度之分。相差物鏡的反差類別和反差程度以及放大倍數(shù)，皆用英文字母和數(shù)字標(biāo)示在物鏡殼中。例如：
20×PH=20倍，正反差，反差程度高。
20×PM=40倍，正反差，反差程度中等。
100×PL=100倍，正反差，反差程度低。
40×NH=40倍，負(fù)反差，反差程度高。
40×NM=40倍，負(fù)反差，反差程度中等。
100×NL=100倍，負(fù)反差，反差程度低。
100×DH=100倍，暗反差，反差程度高。
40×DM=40倍，暗反差，反差程度中等。
20×DL=20倍，暗反差，反差程度低。
10×BH=10倍，明反差，反差程度高。
20×BM=20倍，明反差，反差程度中等。
40×BL=40倍，明反差，反差程度低。
相差鏡檢時，依被檢樣品的種類、結(jié)構(gòu)和反差程度的不同，而確定應(yīng)選用相差物鏡的種類。這不存在死硬的規(guī)定，可依觀察者的習(xí)慣和愛好而變。一般來說，相差物鏡的應(yīng)用范圍如表1-1。
就某一具體被檢物體來說，適于明反差或適于暗反差，難以定論。通常是哪一種相差物鏡都能得到清晰的像，只是有的物鏡更好些而已，因此可任意選擇。有的樣品只適于某一種相差物鏡。暗反差物鏡對習(xí)慣于明視場境檢者很適宜。當(dāng)與染色標(biāo)本進(jìn)行比較或進(jìn)行測定以及加強(qiáng)半透明物體的反差時，多用暗反差；而計算數(shù)量或觀察物體運(yùn)動以及研究極小的樣品時，多使用明反差。
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?表1-1? 相差物鏡應(yīng)用范圍
?字母 | ? 反差 | ? ? ? ? ? ? ? ?應(yīng)用 |
? P | ? ?正 | 觀察細(xì)胞或細(xì)胞核的內(nèi)部結(jié)構(gòu) |
? N | ? ?負(fù) | 觀察微小的物體如孢子、鞭毛和活的樣品等 |
? H | ? ?高 | 當(dāng)樣品反差較低時 |
? L | ? ?低 | 當(dāng)樣品反差較高時 |
? M | ? ?中 | 當(dāng)樣品反差為中等時 |
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總之，在相差鏡檢時，于諸多的相差物鏡中選一物鏡，絕非易事。除參考上表所列應(yīng)用范圍外，最佳方法是通過各種類型的相差物鏡進(jìn)行實(shí)際鏡檢測定，找出最宜相差物鏡。
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